實(shí)驗原理
早期的shRNA載體多采用RNA聚合酶III型啟動(dòng)子介導shRNA的表達，RNA聚合酶III型啟動(dòng)子如鼠源的U6啟動(dòng)子和人源的H1啟動(dòng)子可以在哺乳動(dòng)物細胞中表達小分子RNA。隨著(zhù)miRNA干擾機制的深入研究，發(fā)展出第二代siRNA載體，即采用RNA聚合酶II型啟動(dòng)子CMV表達含側翼序列的miRNA模擬物（見(jiàn)圖2.2）。該載體模擬miRNA的加工，表達出來(lái)的shRNA進(jìn)入RISC沉默復合物的效率要比RNA聚合酶III型啟動(dòng)子表達的shRNA高倍十倍，抑制效率更好，且可以和EGP協(xié)調表達，方便觀(guān)察轉染效率。
實(shí)驗流程
結果展示
